TugasKu: Review Jurnal Berbasis Antibodi dan Antigen (Immunologi)

TUGAS IMMUNOLOGI

REVIEW JURNAL BERBASIS ANTIBODI DAN ANTIGEN

Antibodies Against Multiple Merozoite Surface Antigens of the Human Malaria Parasite Plasmodium falciparum inhibit Parasite Maturation and Red Blood Cell Invasion

Nama             : Diana Putri Hapsari

NIM              : M0410018

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2012

            Dalam jurnal antibodies against multiple merozoite surface antigens of the human malaria parasite Plasmodium falciparum inhibit parasite maturation and red blood cell invasion menggunakan metode ELISA dan pLDH-essay. Dimana kekhususan dan efek dari antibodi diarahkan terhadap MSP-1, MSP-6, MSP-7  perkembangan darah pada tingkatan parasit. Maka dari itu untuk memahami cara kerja antibodi ini, efeknya terhadap proses pada MSP-1 dan AMA-1 di permukaan merozoits diselidiki. Yang pertama kali dilakukan untuk metode Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pada penelitian ini adalah dengan menyiapkan microtitter plate yang dilapisi protein rekombinan yang diinkubasi selama semalam dengan 0,1 ml dari 100 nM protein dalam 50 nM buffer natrium karbonat, pH 9,6 pada suhu 4^oC. Plate dicuci 2 kali dengan TBST (10 mM Tris-HCl, pH 8, 150 mM NaCl, 0,05% tween 20) sebelum diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar dengan buffer blocking (TBST mengandung susu bubuk 1%). Antibodi yang diencerkan secara beruntutan dalam buffer blocking dan diinkubasi dengan plat yang dilapisi antigen selama 2 jam pada suhu kamar. Setelah dicuci 3 kali dengan TBST, konjugat fosfatase IgG-alkaline goat anti-rabbit diencerkan dengan perbandingan 1:2.500 dalam blocking buffer, ditambahkan ke plat dan diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar. Substrat p-nitrofenil-fosfat (1 mg/ml dalam 0,96% (vol/vol)) dietanolamina, pH 9,5 dan 1 mM MgCl₂ ditambahkan dan diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar dalam keadaan gelap. Reaksi dihentikan dengan 0,1 ml 2M NaOH, dan absorbansi diukur dengan panjang gelombang 405 nm. Antibodi endpoint titer dihitung sebagai cairan yang menghasilkan absorbansi (kepadatan optik pada 405 nm, OD405) dari 1,0. Pra-immun antibodi digunakan sebagai serum negatif kontrol.

            Di jurnal ini bertujuan untuk mengembangkan vaksin malaria dari komponen MSP-1, MSP-6, MSP-7 komplek dan AMA-1 dimana protein tersebut ditemukan di permukaan Plasmodium falciparum merozoit 1. Selama invasi eritrosit komplek ini, maupun protein  membran integral disebut apical membran antigen-1 (AMA-1), yang mana AMA-1 tersebut merupakan gudang dari permukaan parasit yang mengikuti proteolisis spesifik.

            Rancangan penelitiannya berawal dari memproduksi rekombinan dari ectodomain AMA-1 dan protein MSP. Setelah itu mengambil antibodi dari kelinci,  jenis kelinci yang digunakan adalah 3 kelinci putih Selandia Baru. Pemurnian IgG dari serum pra-immun, dan IgG terhadap protein ClpB Eschericia coli, yang digunakan sebagai antibodi untuk mengendalikan malaria yang tidak berhubungan. Digunakan pula tikus sera untuk diimunisasi dengan rekombinan AMA-1 ectodomain yang telah dimurnikan. Kemudian MSP-1₁₉ tikus yang spesifik mAb 12.8, 12.10, 7.5, MSP-1₈₃ tikus yang spesifik mAb 89.1, dan MSP-1₃₃ manusia yang spesifik mAb X509, sebagaimana telah AMA-1 tikus yang spesifik mAb 4G2 [19] dan tikus mAb 4F3. Setelah itu dilakukan metode ELISA, lalu dilakukan kultur parasit. Parasit yang digunakan adalah Plasmodium falciparum 3D7 yang tumbuh dibawah kondisi standar dan alami-dibebaskan merozoite bebas yang telah diisolasi. Dilakukan uji pengolahan untuk menguji pengaruh antibodi pada penumpahan AMA-1 dan MSP-1 dari merozoit terisolasi. Kemudian dilakukan SDS-PAGE dan western blotting. Parasit lysates difraksinasikan oleh SDS-PAGE di bawah kondisi non-pereduksi sebelum transfer ke membran ekstra nitroselulose  Hybond-C . Lalu dilakukan uji penghambatan pertumbuhan parasit, pemurnian IgG kelinci diperiksa untuk menentukan potensi mereka dalam menghambat replikasi P. falciparum dengan mengukur tingkat LDH di trophozoite akhir atau awal tahap skizon. Sebelum digunakan dalam uji penghambatan pertumbuhan, antibodi kelinci dipersiapkan yang belum diabsorbsi pada sel darah merah manusia tipe A.